本书以构建整合型实验教学体系为目的,整合了细胞生物学、医学遗传学、生物化学及分子生物学的实验教学内容,并结合教师的科研,构建新的“四合一”实验教学体系,既克服了单门课程教材体系单一、内容相互割裂的缺陷,也有利于培养学生的综合分析能力与实践能力。
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基础医学的实验教学是培养学生实践能力、观察与分析能力和科学思维的主要方式,提高实验教学质量是提升整体医学教育水平的重要途径。细胞生物学、医学遗传学、生物化学及分子生物学的实验技术是当代医学研究的重要手段和方法,已广泛渗透到临床医学的各个领域,也是医学相关专业和各层次学生的必修实验课。为了适应高等医学院校整合实验教学的改革和发展,构建多层次、多模块的分子医学实验教学体系,同时鉴于整合课程没有合适的实验教程,我们编写了本书。这是教学改革实践的要求,也是对整合课程教材建设的探索。
本书共收编了26个实验,包括了上述4门课程的常规核心技术,如细胞培养、细胞器分离与纯化、细胞骨架显示等细胞生物学技术;骨髓细胞染色体与人淋巴细胞G带核型分析、红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶家系分析等医学遗传学实验;也包括血红蛋白的醋酸纤维薄膜、等电聚焦与凝胶柱色谱分离、碱性磷酸酶的分离纯化及比活性测定等生物化学实验;还包括真核基因组与线粒体DNA提取、G6PD基因扩增、小鼠PKC8基因克隆与表达等分子生物学实验。综合性实验则是上述整合课程的实验技术及其应用,如红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶活性测定及家系分析、镰状红细胞贫血与地中海贫血的基因诊断等;而抗氧化分子清除自由基活性检测与细胞周期、细胞增殖与凋亡检测等设计性实验则结合了教师科研课题,有利于培养学生的科研思维。
本书注重上述4门课程的基础性实验与整合性实验相结合、实验技术与临床应用相结合、实践技能与科研素质培养相结合。各高等医学院校根据各专业各层次学生的培养目标和要求,可选择本书中不同技术、不同层次的实验项目实施教学。此外,本书可以作为广大教师、研究生、医师和技术人员科研工作的重要参考书。
由于编者水平有限,各医学院校的实验教学模式和条件存在差异,书中存在不当或错误之处,恳请同行专家和同学们批评指正,提出宝贵意见。
目 录
前言
实验一 光学显微镜的结构和使用1
实验二 光镜下细胞基本形态结构的观察及生物绘图6
实验三 细胞培养技术9
实验四 细胞核与线粒体的分级分离18
实验五 细胞内DNA 和RNA及细胞骨架(微丝)观察21
实验六 CCK-8法检测HepG2细胞的增殖25
实验七 小鼠骨髓细胞染色体标本的制作及观察28
实验八 人外周血淋巴细胞G显带染色体标本制备及核型分析32
实验九 血清蛋白的盐析及清/球比值的测定38
实验十 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用41
实验十一 血红蛋白的醋酸纤维薄膜电泳44
实验十二 血红蛋白的等电聚焦分离及其等电点测定47
实验十三 血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离52
实验十四 兔肝碱性磷酸酶的分离纯化及比活性测定55
实验十五 红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶活性测定及家系分析60
实验十六 真核细胞线粒体基因组DNA提取65
实验十七 人类性别鉴定(基于PCR、X或Y染色质的方法)68
实验十八 G6PD基因全序列查找、引物设计及外显子12 的扩增76
实验十九 镰状红细胞贫血的基因诊断(RFLP分析)81
实验二十 地中海贫血初步筛查及缺失型α地贫基因诊断84
实验二十一 抗氧化分子清除自由基活性检测87
实验二十二 小鼠脑组织总RNA提取与RT-PCR获取真核基因片段91
实验二十三 小鼠PKCε基因的克隆、鉴定及其6His融合蛋白的大肠杆菌表达和纯化97
实验二十四 细胞周期、细胞增殖与凋亡检测的实验设计106
实验二十五 自毁容貌综合征诊断的实验设计108
实验二十六 G6PD缺乏症诊断的实验设计110
分子医学实验报告111