围绕课题"目的基因原核表达载体的构建及目的蛋白的诱导表达和检测鉴定"探究,开展一系列相关的分子生物学实验,学生在课题探究的"实战"过程中掌握分子生物学技术、提高发现问题、分析问题、解决问题的能力、团队协作的能力等。
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目录
前言
实验室守则 1
实验内容概述 2
实验一 分子生物学实验常用仪器设备 4
实验二 培养基的配制与细菌的纯化培养 7
实验三 质粒的提取 10
实验四 目的基因PCR扩增及扩增产物回收 12
实验五 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 16
实验六 PCR扩增产物与T载体的连接 20
实验七 大肠杆菌感受态细胞的制备 24
实验八 重组质粒的构建及转化 26
实验九 阳性克隆的筛选鉴定 31
实验十 目的蛋白的诱导表达及检测 36
实验十一 蛋白质印迹法鉴定目的蛋白 41
实验十二 细胞中总RNA的提取 44
实验十三 逆转录PCR获取目的基因 47
实验十四 Dps融合表达载体的构建 49
实验十五 目的基因与融合表达载体重组、Dps融合蛋白诱导表达及检测 55
实验十六 目的蛋白的分离纯化 58
实验十七 目的蛋白的功能鉴定 63
参考文献 68
附录1 常用试剂及其配制 69
附录2 常用实验材料保存方法 80
附录3 常用仪器设备使用说明及使用注意事项 81
附录4 实验时间安排建议 88
附录5 实验小贴士 90
附录6 实验报告格式 91