本书内容主要基于作者团队建立的多种用于抗真菌药物筛选和活性评价的医学真菌生物实验标准操作方法,旨在为真菌药物研发提供参考依据。主要内容分为四篇:第1篇,体外抗真菌活性筛选常用方法;第2篇,抗真菌作用机制研究常用方法;第3篇,真菌感染动物模型建立及体内抗真菌活性评价;第4篇,常用的真菌分子生物学实验及应用举例。
本书可为真菌相关研究的科研工作者提供标准和参考。
刘娜,海军军医大学药学系副教授、硕士研究生导师,研究方向为抗真菌药物研究,主要聚焦于抗真菌新靶点、新机制和新分子骨架发现。作为项目负责人主持国家自然科学基金面上项目(2项)、青年基金、军队生物安全研究专项等6项研究课题;作为项目骨干参与国家杰出青年科学基金、国家重点研发计划、上海市教委科技创新重大项目、上海市优秀学术带头人等项目。发表SCI论文27篇,获授权发明专利17项,参编中英文专著6部。作为主要完成人获得上海市科技进步二等奖,入选海军军医大学远航人才计划和A级优秀教员,担任《中南药学》杂志编委。
第1篇 体外抗真菌活性筛选常用方法 001
1 体外抗真菌活性测试 002
2 体外协同抗真菌活性测试 006
3 马拉色菌的体外抗真菌活性测试 010
第2篇 抗真菌作用机制研究常用方法 013
4 真菌与肿瘤细胞互作实验 014
5 平皿/纸片扩散实验 017
6 时间-生长曲线测试 020
7 时间-杀菌曲线测试 023
8 生物被膜形成抑制实验 026
9 成熟生物被膜清除实验 029
10 菌丝生长抑制实验 033
11 尿素酶生成抑制实验 036
12 黑素抑制实验 039
13 荚膜生长抑制实验 042
14 荚膜多糖含量测定实验 045
15 真菌细胞表面疏水性测试 048
16 透射电子显微镜实验 051
17 真菌细胞共定位成像 054
18 真菌活细胞激光共聚焦实时成像 057
19 甾醇含量测定实验 060
20 细胞周期实验 063
21 细胞凋亡实验 066
第3篇 真菌感染动物模型建立及体内抗真菌活性评价 069
22 小鼠系统性念珠菌感染模型 070
23 小鼠隐球菌性脑膜炎模型 073
24 小鼠皮肤感染模型 077
25 小鼠阴道炎感染模型 080
26 大蜡螟幼虫模型 084
27 线虫实验 087
28 血脑屏障透过实验 090
第4篇 常用的真菌分子生物学实验及应用举例 093
29 基因敲除技术 094
30 实时RT-PCR 实验 100
31 Western blot 实验 103
32 Hsp90 抑酶活性测试 106
33 HDAC 抑酶活性测试 110
34 组蛋白去甲基化酶抑酶活性测试 113
附录 121
附录1 常见病原真菌及其活化、冻存方法 122
附录2 常用培养基及缓冲溶液的配制方法 127
附录3 实验相关仪器 131
附录4 缩略语表 132
参考文献 134