《生物化学实验》共设置49个实验,分为45个基础性实验及4个综合性实验,基础性实验以实用性强、重复性好为编写原则;综合性实验以操作规范并兼顾先进性为教学目的,融合了生物化学发展中的多种实验方法及技术。本实验教材内容涵盖了生物化学研究中常用的技术和方法,从糖类、脂质、蛋白质、核酸、酶、维生素、生物氧化等几大类展开具体实验,附录部分对实验室常用缓冲溶液及其配制方法进行了介绍。
本教材适合应用型本科院校生物科学、生物技术、生物工程、生态学、农学等专业学生作为教材使用;也可为其他相关专业学生或实验室工作人员提供参考。
第一章 绪论 1
一、生物化学实验须知 1
二、实验室常用知识介绍 7
三、生物化学实验室常用仪器的使用 8
四、生物化学实验常用实验方法 17
第二章 糖类 35
实验1 糖的呈色反应和还原糖的检验 35
实验2 还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法) 42
实验3 粗纤维的测定 46
实验4 多糖的提纯与鉴定 49
第三章 脂类 53
实验5 粗脂肪含量的测定 53
实验6 血清中甘油三酯的测定(GPO-PAP酶法) 56
实验7 油脂碘价的测定(Hanus法) 59
实验8 食用油脂酸价和过氧化值的测定(滴定法) 63
实验9 血清总胆固醇的测定(邻苯二甲醛法) 67
实验10 血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法) 70
第四章 蛋白质 73
实验11 蛋白质的颜色反应与沉淀反应 73
实验12 蛋白质的等电点测定 77
实验13 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点 80
实验14 酪蛋白的制备 85
实验15 蛋白质含量的测定(双缩脲法) 87
实验16 考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质 89
实验17 紫外吸收法测定蛋白质浓度 92
实验18 蛋白质含量测定(凯氏定氮法) 94
实验19 BCA法测定蛋白质含量 98
实验20 氨基酸的分离鉴定(纸色谱法) 100
实验21 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 104
实验22 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白 109
实验23 葡聚糖凝胶色谱使蛋白质脱盐 114
实验24 间接ELISA测定抗体的效价 118
第五章 色素与维生素 123
实验25 柱色谱分离色素 123
实验26 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 127
第六章 酶 131
实验27 酶的激活、抑制作用 131
实验28 酶的专一性 134
实验29 温度、pH值对酶活力的影响 137
实验30 肝脏转氨酶(谷丙转氨酶)活力的测定 140
实验31 超氧化物歧化酶的提取及酶活性测定 145
实验32 过氧化氢酶活性的测定(碘量法) 149
实验33 苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定 152
实验34 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清LDH同工酶 157
实验35 血清GPT测定(赖氏法) 160
实验36 碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定 163
实验37 凝胶过滤色谱纯化碱性磷酸酶 169
实验38 DEAE-纤维素柱色谱纯化碱性磷酸酶 172
第七章 核酸 175
实验39 质粒DNA的提取及定性定量测定 175
实验40 酵母RNA的提取及组分鉴定 178
实验41 定磷法测定核酸含量 181
实验42 植物基因组DNA提取(CTAB法) 184
实验43 肝组织中核酸的提取和鉴定 187
第八章 生物氧化 191
实验44 肌糖原的酵解作用 191
实验45 脂肪酸的β-氧化作用———酮体的生成及测定 194
第九章 综合性实验 199
实验46 小麦萌发前后淀粉酶活性的比较 199
实验47 脲酶的制备及其生物学性质的研究 203
实验48 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 208
实验49 激素对血糖浓度的影响 213
附录 217
Ⅰ实验室常用缓冲溶液及配制方法 217
Ⅱ实验报告模板 229
参考文献 235