《食品微生物学实验/食品科学与工程系列教材》以微生物学的基础知识为出发点,以微生物学和食品加工过程中所涉及的微生物为核心,汇编了研究和生产中经常涉及的实验技术,具有内容广泛、选材结合实际、方法先进的特点。《食品微生物学实验/食品科学与工程系列教材》主要包括6个方面的内容:第1篇,微生物学基础实验技术;第2篇,微生物生理生化实验技术;第3篇,发酵食品微生物学技术;第4篇,食品安全微生物学技术;第5篇,微生物育种与分子生物学技术;第6篇,食用与药用真菌实验技术。书后还附录了微生物学实验中常用培养基配方、常用试剂配方等,便于读者使用。
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《食品微生物学实验/食品科学与工程系列教材》:
实验1-2环境中的微生物检测及菌落特征观察
一、目的要求
了解环境中各类微生物的存在,并比较不同环境中微生物的数量和种类;理解微生物实验无菌操作技术的重要性;初步认识各类微生物的菌落特征。
二、实验原理
微生物在环境中广泛存在,但由于其个体微小,绝大部分用肉眼无法观察到。人工制备的培养基中含有微生物生长所需要的各种营养成分,将取自不同来源的样品接种于培养基上,并在适宜的温度条件下培养,则微生物细胞能够通过繁殖而形成肉眼可见的群体,即菌落。不同微生物对营养物质有不同的要求,实验室一般用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(简称营养琼脂培养基)进行细菌的培养,而马铃薯蔗糖琼脂培养基(PDA)一般用于真菌的培养。不同微生物形成的菌落也有其各自的特征,如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑,边缘整齐或不整齐,菌落透明或半透明或不透明、颜色及质地疏松或紧密等。因此,可通过选用营养琼脂平板和PDA平板来分别检测环境中的细菌和真菌等微生物的数量和种类。
三、实验材料
(1)培养基:营养琼脂平板,马铃薯蔗糖琼脂平板。
(2)仪器及其他用品:高压蒸汽灭菌锅,培养箱,棉签(装在试管或小玻璃瓶中灭菌后备用),试管架,记号笔,酒精灯,无菌水(装在试管中备用),废物缸等。
四、实验步骤
取营养琼脂平板和PDA平板各5副,其中各一副作为对照不做任何处理,其余各4副分别按如下方法处理。
1.空气中微生物的检测
取营养琼脂平板和PDA平板各一副;打开培养皿盖,在空气中暴露约10min后盖上;用记号笔在培养皿的底部做好标记,将培养皿倒置于25℃培养箱中培养3~4d。
2.实验台面上微生物的检测
(1)取棉签:左手拿装有棉签的试管,在火焰旁用右手的手掌边缘和小指夹持并拔出棉塞(或试管帽);将试管口在酒精灯(或煤气灯)火焰上稍作烧灼;倾斜试管,用右手拇指和食指小心地取出一根棉签;烧灼管口,塞回棉塞(或试管帽),将试管放回试管架。
(2)弄湿棉签:左手取无菌水试管,同上方法拔出棉塞(或试管帽)并烧灼试管口;将棉签插入水中,再提出水面并在管壁上挤压一下以除去过多的水分;小心取出棉签,烧灼管口,塞回棉塞(或试管帽),并将试管放回试管架。
(3)取样:将湿棉签在实验台面上约2cm2的范围内来回擦拭数次(图1-2A),以吸附台面上的微生物。
(4)接种:取营养琼脂平板一副,在火焰旁用左手拇指和食指使培养皿开启一条缝;将棉签伸入并在培养基表面来回擦拭接种(图1-2B),注意不要将培养基擦破;立即闭合皿盖,将用过的棉签丢弃至废物缸中;在培养皿底部用记号笔做好标记。
图1-2实验台面或皮肤表面微生物的取样与接种方法
A.用湿棉签在实验台面或皮肤表面来回擦拭,以粘取微生物;B.将湿棉签在平板培养基的表面来回涂抹,
使粘取的微生物转移到培养基上
(5)培养:将培养皿倒置于25℃培养箱中培养3~4d。
采用同样的方法取样并接种PDA平板,做好标记后将培养皿倒置于25℃培养箱中培养3~4d。
3.人体皮肤表面微生物的检测
采用上述方法,另取无菌棉签并弄湿,然后将湿棉签在自己手臂或耳根等处的皮肤表面约2cm2的范围内来回擦拭数次,并接种营养琼脂平板和PDA平板。做好标记后将培养皿倒置于37℃培养箱中培养3~4d。
4.自来水中微生物的检测
采用上述方法,另取无菌棉签,但无需用无菌水弄湿,而是直接蘸取少量自来水;然后将蘸有自来水的湿棉签在营养琼脂平板和PDA平板的表面来回擦拭接种。做好标记后将培养皿倒置于25℃培养箱中培养3~4d。
五、实验报告
培养3~4d后,用相机拍摄各个平板的照片,并填写表1-2。
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